Февраль 14th, 2010 by admin

В дальнейшей работе, используя различные условия культивирования на полупроницаемых мембранах, определялась возможность выделения диффундирующих антигенов чумного микроба и изучалась их иммуногенная активность.

В качестве штаммов-продуцентов были использованы культуры вакцинных штаммов Y. pestis ЕВ и К-1, которые культивировались на полупроницаемых мембранах марок «Мил-липор» и «Владипор» (диаметр пор 0,2-0,4 мкм) при следующих условиях: среда выращивания – бульон Хоттингера, рН 7,2; оптимальная посевная доза (0,01 млрд./см2) двухсуточной стандартной бульонной культуры была рассчитана, исходя из посевной площади фильтров (130 см2) и количества питательной среды между ними (100 мл). Культивирование происходило в условиях аэрации при 28 й 37° С в течение 7 суток.

Для обнаружения диффундирующих антигенов применяли реакцию преципитации в агаровом геле. Определяя принадлежность антигенов, использовали различные специфические сыворотки и эритроцитарные диагностикумы против ФІ и лппополисахарида.

Для исследования было получено 10 экспериментальных серий препарата. В первой серии опытов фильтрат ставили против цельной агглютинирующей противочумной сыворотки. Было отмечено, что максимальное число зон преципитации (8 линий у штамма ЕВ и 11 линий у штамма К-1) появилось на 2-е сутки культивирования и сохранялось на 7-е, но уже с менее заметными границами. При этом количество зон преципитации не зависело от температуры культивирования (28 и 37° С); как штамма ЕВ, так и К-1. Видимо, в данном случае этот фактор имеет значение при количественном выделении диффундантов так же, как, например, при выделении ФІ чумного микроба.

Учитывая величину пор фильтрующих пластин, способную пропускать соединения до 2000000 дальтон, т. е. фракции с молекулярным весом, куда входят ФІ, ФП, ЛПС и т. д., в дальнейших сериях для определения диффундирующих антигенов и изучения их свойств пользовались только 2-суточными пробами.