Февраль 3rd, 2010 by admin

С целью изучения этой гипотезы нами были проведены исследования с антителами против О-антигена и фермента II ФЕП-зависимой глюкозотранспортной системы холерных вибрионов.

В экспериментах использовали кроличью холерную О-сыворотку, из которой путем адсорбции нехолерными вибрионами, убитыми формалином, были адсорбированы Н-анти-тела и антитела к некоторым другим антигенам. Сыворотку против фермента II ФЕП-зависимой глюкозотранспортной системы (сыворотка антифермент II) получали путем подкожного введения кроликам указанного фермента (выделенного из клеток холерных вибрионов) по схеме: 1-я инъекция – 0,5 мг белка фермента, 2-я – 1 мг, 3-я – 2 мг. Через 10 суток после третьей инъекции проводили тотальное кровопускание и получали сыворотку. Титр антиферментных антител в сыворотке был равен 20 АФЕ (антиферментные единицы) в 1 мл, т. е. в разведении 1 :20 сыворотка вызвала 50% ингибирование фермента II ФЕП-зависимой глюкозотранспортной системы.

Опыты ставили по следующей методике. В пробирках готовили экспериментальные смеси сывороток с холерными вибрионами в питательной среде – 1% пептонной воде. В первую пробирку добавляли 0,5 мл холерной О-сыворотки, разведенной 1:4 в 1% пептонной воде, -4-1 мл суспензии холерных вибрионов; во вторую пробирку – 0,5 мл сыворотки антифермент II, разведенной 1:4 в 1% пептонной воде, 4-1 мл суспензии холерных вибрионов. После 30-минутной экспозиции при 37° С в пробирки вносили по 0,5 мл 1 % пептонной воды. В третью пробирку вносили 0,5 мл сыворотки антифермент II, разведенной 1:4 в 1 % пептонной воде, 4-1 мл суспензии холерных вибрионов, затем смесь выдерживали 30 мин при 37° С и добавляли 0,5 мл холерной О-сыворотки, разведенной 1:4 в 1 % пептонной воде. В четвертую пробирку вначале вносили холерную О-сыворотку, разведенную 1:4 в 1 % пептонной воде, затем суспензию холерных вибрионов и после 30-минутной экспозиции при 37° С добавляли 0,5 мл сыворотки антифермент II.

Суспензию холерных вибрионов готовили на 0,85% растворе хлористого натрий из смыва с 18-часовой агаровой культуры классического холерного вибриона серотипа Ина-ба, штамм 569В. В 1 мл суспензии содержалось 200 клеток живых вибрионов. В экспериментальных смесях рН=7,6.